这就是CoIP试剂盒的检测流程

　　CoIP试剂盒是基于抗体和抗原之间结合的专一性用于研究蛋白质相互作用的经典方法。其原理是细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在许多蛋白质与蛋白质之间的相互作用体被保留下来，利用目标蛋白质特异性抗体免疫沉淀，沉淀得到的蛋白质复合体能够通过变性凝胶电泳分离开来，以此定性或定量分析几种蛋白质间相互作用力大小。

　　

　　CoIP试剂盒能够高效完成单标签融合蛋白或双标签融合蛋白，不仅可以调取Flag或TST单标签融合蛋白及其互作蛋白，又可以调取Flag和TST双标签融合蛋白及其互作蛋白，另外相对于传统的Flag-HAIP试剂盒，本试剂盒具有产物中不含抗体且蛋白没有变性的优点，其产物做WesternBlot检测时不会受IgG影响，后本试剂盒中亲和材料与诱饵蛋白结合多且强，调取的互作蛋白更多。

　　
 

　　在蛋白表达和定位研究中，可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列连接起来，可以连接在目的蛋白的C端或N端，然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞亦或受精卵中。TST标签是strep-tagⅡ（Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys）的升级版，由两个strep-tagⅡ外加连接臂组成，与融合蛋白结合能力更强，结合位点更多，其作用是标记蛋白。在蛋白表达和定位研究中，可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和TST-tag基因序列连接起来，可以连接在目的蛋白的C端或N端，然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞亦或受精卵中。

　　

　　这就是CoIP试剂盒的检测流程：

　　

　　1、将细胞裂解液与TST树脂，室温下孵育1-2小时，或4℃过夜。

　　

　　2、在室温下，经过漂洗，洗脱得到洗脱液1。

　　

　　3、在洗脱液1中加入到Flag树脂中，室温孵育2-3小时，或4℃过夜。

　　

　　4、室温下，漂洗，加洗脱缓冲液B得到洗脱复合物。