快速封闭液操作时需要注意些什么？

　　快速封闭液是新一代的即用型、高效快速封闭液。封闭时间仅需10分钟，效果优于脱脂奶粉、BSA、酪蛋白等传统封闭液，可阻止抗体检测期间的非特异性结合，但允许进行特异性检测。与传统封闭液相比，有更高的信号，更低的背景值，信噪比更高。该试剂不含有哺乳动物来源的蛋白成分，避免与抗体发生交叉反应。该缓冲液可与磷酸化的抗体以及NC膜和PVDF膜兼容，但不适用于生物素标记的抗体。

　　
 

　　1、即用型封闭液，无需配制，使用便捷；

　　

　　2、封闭时间短，仅需10min，快速高效；

　　

　　3、背景低、信噪比高，优于常规BSA、酪蛋白等封闭效果；

　　

　　4、不含哺乳动物来源的蛋白，确保低背景和高信噪比，可兼容磷酸化的抗体。

　　

　　快速封闭液完成转膜后，将膜移入到平皿或者其他适合的容器中。根据膜的大小，加入适量体积的封闭液，确保充分浸没覆盖膜，对于7.5x8cm的膜推荐使用量5-10mL。置于水平摇床上，室温条件下振荡孵育10分钟。取出封闭完成的膜，用洗涤液冲洗膜2-3次，即可用于一抗孵育等后续实验。

　　

　　快速封闭液操作注意事项：

　　

　　1、通常用于PVDF膜或NC膜的封闭时间为10分钟。对于背景低的抗体，可以缩短到5分钟，而对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。

　　

　　2、由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验或抗体，可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。

　　

　　3、信号弱或者无信号：有可能是上样量不足；转膜效率低；抗体效价低，特异性差等原因造成，需要根据实验情况优化实验条件。

　　

　　4、背景高：有可能是抗体使用量过多；膜洗涤时间不足；抗体和封闭液发生交叉反应；试剂或仪器设备被污染等原因造成，需要根据实验具体情况进行调整。

　　

　　5、为了您的安全和健康，实验时请穿实验服并戴一次性手套操作。