His蛋白纯化试剂盒

产品名称：His tagged Protein Purification Kit

品牌：Engibody

货号：P3406

简介：his蛋白纯化试剂盒，用于his标签融合蛋白的纯化富集。

Description

His-Tagged Protein Purification Kit (Ni-NTA Agarose Resin 6FF, Soluble Protein)

Components

one column;  4ml Ni2+ Sepharose 4B;  5g NiSO4;  6g imidazole;  10g EDTA

Storage instruction

Store at +4°C and do not freeze.

Protocols

Procedure

1).Resuspend the Ni2+ Sepharose 4B by tapping and inverting the vial several times immediately before dispensing. Do not vortex. Then transfer 2ml into the column, the gel will sedimentate naturally.

2).Wash the column with 5 bed volumes of water, then equilibrate the column with  5 bed volumes of binding buffer（20mmol/L phosphate buffer, 500mmol/L NaCl, pH 7.8）.

3).Centrifuge cell lysate（20mmol/L phosphate buffer, 500mmol/L NaCl, pH 7.8）at 12,000 g, collect the supernatant and load it into the column at a rate of 0.1ml per min.

4).Wash the column with 5-10 bed volumes of Binding buffer at a rate of 0.1ml per min.

5).Elute Separately with Elution buffer of imidazole solutions at diferrent concentration(usually 10, 20, 50, 100, 150, 200mmol/L, depending on his tagged fusion protein) . Then collect every eluate.

6).SDS-PAGE gel electrophoresis can analyze the purity of his tagged fusion protein).

Regeneration

1).Wash the column with 2 bed volumes of 0.2mol/L Acetic acid, then Wash the column with 5 bed volumes of water.

2).Wash the column with 5 bed volumes of 50％ ethanol, then Wash the column with 5 bed volumes of water.

3).Wash the column with 5 bed volumes of 0.1mol/L EDTA, then Wash the column with 5 bed volumes of water.

4).Wash the column with 2 bed volumes of 0.1mol/L NiSO4, then Wash the column with 5 bed volumes of water.

试剂盒描述

his标签融合蛋白纯化试剂盒（Ni-NTA琼脂糖树脂6FF，可溶性蛋白）

kit内组份

一个clolumn（12ml规格重力流空柱子）；4ml Ni-NTA琼脂糖6FF；5克硫酸镍；6克咪唑；10克EDTA，缓冲液

存储说明

储存于+4°C，不要冻结。

Protocol

步骤

1).在配药前，轻敲并翻转小瓶几次，重新注入Ni2+Sepharose 4B。不要涡流。然后将2ml转移到柱中，凝胶将自然沉淀。

2).用5床体积的水洗涤柱，然后用5床容量的结合缓冲液（20mmol/L磷酸盐缓冲液，500mmol/L NaCl，pH 7.8）平衡柱。

3).离心12000 g的细胞裂解液（20mmol/L磷酸盐缓冲液，500mmol/L NaCl，pH 7.8），收集上清液并以0.1ml/min的速度将其装入柱中。

4).用5-10床体积的结合缓冲液以0.1ml/min的速率洗涤柱。

5).分别用不同浓度（通常为10、20、50、100、150、200mmol/L，取决于其标记的融合蛋白）的咪唑溶液洗脱缓冲液洗脱。然后收集每一次洗脱液。

6).SDS-PAGE凝胶电泳可以分析his标记的融合蛋白的纯度）。

再生

1).用2床体积的0.2mol/L乙酸洗涤柱，然后用5床体积的水洗涤柱。

2).用5床体积的50%乙醇洗涤柱，然后用5床容量的水洗涤柱。

3).用5床体积的0.1mol/L EDTA洗涤柱，然后用5床容量的水洗涤柱。

4).用2床体积的0.1mol/L NiSO4洗涤柱，然后用5床体积的水洗涤柱。

仅用于科研，不作用人体